پابندی اینجیمز انزائیمز ہیں جو واحد اور ڈبل پھنسے ہوئے ڈی این اے کاٹا. ہر پابندی انزیم میں ایک مخصوص نیوکلیوٹائڈ ترتیب ہے، جسے پابند سائٹ کہا جاتا ہے، جو اسے تسلیم کرتا ہے اور کم کرتا ہے. ڈی این اے کی ترتیب، باہمی تجزیہ، اور ڈی این اے کے کلوننگ اور پرسمیٹریشن کے لئے پابندی کے انزائمز استعمال کیے جاتے ہیں. سائنسی ماہرین کو روکنے کے جزووں میں اظہار ویکٹر میں دلچسپی کے جین ڈالنے کے لئے پابندی کے انزیمز کا استعمال کرتے ہیں، ڈی این اے انوولس جو الگ الگ طور پر کروموسومل ڈی این اے سے نقل کر سکتے ہیں. اس ویکٹر کو دلچسپی کے جین پر مشتمل کیا جاسکتا ہے، اس کے بعد اظہار اور کردار پروٹین کے بیکٹیریل کش میں داخل کیا جاسکتا ہے.
دن کی ویڈیو
مرحلہ 1
پابندی کے نقطہ نظر سے دیکھ کر اپنے ویکٹر پر پابندی اینجیم سائٹس کی شناخت کریں. پابندی کا نقشہ آپ کو بتائے گا کہ کونسلز آپ کے ویکٹر کو کاٹ دیں گے، اور کہاں.
مرحلہ 2
ایک پابندی اینجیم کا انتخاب کریں جس میں آپ کے جین داخل ہونے پر موجود سائٹ بھی شامل ہے، داخل کرنے کے سلسلے کو دیکھ کر. اس بات کو یقینی بنائیں کہ پھانسی کی سائٹ آپ کے داخل ہونے پر ایک ایسی حیثیت رکھتی ہے جو دلچسپی کے جین سے باہر ہے، لہذا آپ جین کے کسی بھی حصے سے محروم نہیں ہوتے ہیں.
مرحلے 3
اس بات کا یقین کریں کہ آپ کے جین ڈالیں یا ویکٹر میں کسی بھی جگہ کی پابندی کی کوئی نقل نہیں ہے. یہ آپ کے ڈی این اے میں ایک سے زیادہ کمی کا باعث بنتا ہے اور آپ کو ڈیٹا کو گمراہ کرنے میں مدد ملے گی.
مرحلہ 4
پابندی کے انزیموں کو منتخب کرنے کی کوشش کریں جو چپکے ختم ہونے کے بجائے چپچپا سرے سے کاٹ لیں. چپچپا ختم ہوجاتا ہے جب ینجائم کڑھائی میں ڈی این اے ڈبلیوڈینڈ کٹ جاتا ہے، تو ایک واحد بھوک لگی ہوئی عہدیدار چھوڑ رہا ہے جس کے نتیجے میں کسی طرح کے داخل ہونے سے منسلک ہوجاتا ہے. بلٹ ختم ہو جاتی ہے جب ڈبل پھنسے ہوئے ڈی این اے کو آسانی سے کاٹ دیا جاتا ہے، اور یہ منسلک کرنے میں زیادہ مشکل ہے.
مرحلہ 5
آپ کو داخل کرنے کے دونوں سروں کے لئے ایک مختلف پابندی کے انزیم کو منتخب کریں تاکہ یہ یقینی بنایا جائے کہ وہ وابستہ میں ویکٹر میں داخل ہوجائے اور اس بات کو یقینی بنائے کہ ویکٹر اپنے آپ کو منسلک نہیں کرتا.
مرحلہ 6
دو پابندی انزیموں کو منتخب کرنے کی کوشش کریں جو ایک ہی بفر سسٹم اور درجہ حرارت میں اچھی طرح سے کام کریں. اگر یہ ممکن نہیں ہے تو، ہر ہضم الگ الگ چلائیں.
آپ کی ضرورت ہوگی
- جین ڈالیں کی ترتیب
- ویکٹر انتخاب کے لئے پابندی کا نقشہ
- پابندی کے انزیمس اور ان کی کٹ سائٹس کی فہرست
تجاویز
- شناخت کے لئے کچھ ویب پروگرام تیار کیے گئے ہیں ڈی این اے کے آرڈر پر تیزی سے سائٹس. ایسا ایک پروگرام نیو انگلینڈ بائیو لاب سے ہے.
